兔抗人UDP半乳糖(50μl/150μl)
上海笃玛生物兔抗人UDP半乳糖:betaGlcNAc公测1,4-半乳糖转移酶,多肽2多克隆抗体详细说明
操作方法
1.免疫方法 可以采用以下各种方法之一进行免疫。
(1)淋巴结注射法:
①在兔的两后足跖部皮下(或皮内)注射活卡介苗50mg (每侧约0.30ml)。7~10天后,兔跖及腘肌淋巴结肿大;
②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG乳化抗原0.50ml(含IgG 5mg/ml、青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml);③必要时,14天后,重复步骤②一次;④再过7天后,于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG乳化抗原0.50ml(含IgG5mg/ml、青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml);⑤5~7天后,耳静脉采血。测定血清效价。
(2)皮下多点注射法:
①家兔两侧掌(跖内各注射含有完全佐剂抗原0.10ml(IgG含量5mg/ml);
②7~10天后,脊柱两侧多点(颈、胸、腰椎各两点、共6点)皮下注射含不完全佐剂的抗原,每点0.50ml;
③7~10天后,脊柱两侧重复注射一次;
④7~10天后试血。不合格者重复步骤③。
(3)多途径联合注射法:
①两侧掌(跖)内侧皮下注射含完全佐剂抗原0.50ml(IgG量为5mg/ml);
②14天后,多点皮下注射含有不完全佐剂抗原;
③7天后,耳 静脉注射不含佐剂的抗原2ml;
④测定血清抗体效价,不合格者重复步骤③,并适当递增IgG量。
2.效价测定 采用琼脂扩散法。
⑴ 将血清倍比稀释,加入外周孔。
⑵ 中间孔加动物Ig。
⑶ 37℃湿盒琼扩24小时,观察结果。
结果判定
1.抗Ig的效价测定 琼脂扩散效价达1﹕16或1﹕32者为合格。
2.纯度鉴定 采用琼扩法。中间孔加抗Ig血清,外周孔加Ig和标准品Ig。在抗Ig与Ig以及标准品Ig均出现一条沉淀线,且这两条沉淀线相互融合者,说明提取的Ig是纯的。
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