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更新时间：2014-01-02
苏丹红ELISA快速检测试剂盒
使用说明书(仅供研究使用)产品编号：CSB-E12032f
检测范围：1.56 ng/ml-100 ng/ml
**低检测限：0.39 ng/ml
特异性：本试剂盒可用于快速检测苏丹红。与对位红有一定交叉反应。
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定鸡蛋，辣椒粉，辣椒酱等样品中的苏丹红残留。
说明
1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述
苏丹红，又名“苏丹”。苏丹红并非食品添加剂，而是一种化学染色剂。它的化学成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。1995年欧盟(EU)等**已禁止其作为色素在食品中进行添加，对此我国也明文禁止。但由于其染色鲜艳，印度等一些**在加工辣椒粉的过程中还容许添加苏丹红I。
实验原理
本试剂盒采用免疫竞争法检测苏丹红。微孔板上包被有抗苏丹红抗体。加入苏丹红酶结合物和苏丹红标准品或样品，游离苏丹红与苏丹红结合物竞争微量反应板上的抗苏丹红抗体，没有结合的酶结合物被洗去。再向反应孔中加入相应反应底物TMB，作用一定时间后，结合的酶结合物将TMB转化为蓝色，转化成**终的黄色。颜色的深浅和样品中的苏丹红呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 已包被兔抗苏丹红抗体的酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2. 标准品（Standard）：2×100ul/瓶。
3. 样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4. 辣根过氧化物酶标记苏丹红结合物（HRP –Sudan）：1×100ul/瓶（1：100）。
5. 辣根过氧化物酶标记苏丹红结合物稀释液（HRP –Sudan Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
7. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
8. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 超声清洗器
5. 离子交换小柱（PCX）
6. 氮气吹干仪
7. 干净的试管和Eppendof管
8. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，**好用多通道移液器
9. 蒸馏水，容量瓶等
标本的稀释原则：
**先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。**后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶浓度为100 ng/ml，以样品稀释液做系列倍比稀释，分别稀释100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml。样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml。
辣根过氧化物酶标记苏丹红结合物的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记苏丹红结合物稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔50ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根过氧化物酶标记苏丹红结合物加990ul辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
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