D异柠檬酸检测试剂盒(10414433035)

 
D-异柠檬酸试剂盒（酶学试剂盒）
酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）
RIDASCREEN（产品编号：0 414 433）      33次检测
1.  简介
此法适用于食品（果汁、含果汁饮料、水果类产品）和一些物质中D-异柠檬酸，D-异柠檬酸内酯及D-异柠檬酸酯类的检测。

2.  原理
D-异柠檬酸在辅酶Ⅱ及D-异柠檬酸脱氢酶作用下可氧化脱羧生成2-酮戊二酸，二氧化碳及还原型辅酶Ⅱ样； 反应式为
D-异柠檬酸脱氢酶
D-Isocitrate +NADP﹢             2-oxoglutarate +Co2 +NADPH + H+
其中NADPH的量取决于D-异柠檬酸的量，NADPH可在334nm，340nm，365nm下进行测定。

环状的D-异柠檬酸酯类及内酯类经氢氧化钠水解后可按上述原理进行测定； 反应式为
                     PH9-10
D-异柠檬酸酯类 + 水          D-异柠檬酸+乙醇
PH9-10
D-异柠檬酸内酯类 + 水          D-异柠檬酸

3.  试剂盒内容物
----瓶1约30ml溶液，包括：咪唑缓冲液，PH约7.1
----瓶2约60mg冷冻干燥物，包括：NADP 约45mg；硫酸锰
----瓶3为D-异柠檬酸脱氢酶冷冻干燥物约5U

4.  检测溶液的制备
----用瓶1中所有溶液溶解瓶2中内容物，形成溶液2
----用1.8ml重蒸水溶解瓶3内容物形成溶液3

5.  操作者应该注意之事项
----D-异柠檬酸检测中使用的试剂对人无毒害，但仍要遵守所有化学试剂都要遵守的一般全规则
----使用过的试剂放入实验室垃圾桶，如有需要在保留 

6.  储存条件
----瓶1需在2-8℃下保存（见标签），溶液1使用前需回至室温20-25℃
----瓶2需保存在2-8℃(见标签)，溶液2在2-8℃下可保存4周，-15℃到-25℃下可保存约两个月
----瓶3需在2-8℃下保存（见标签），溶液3在2-8℃下可保存4周，-15℃到-25℃下可保存约两个月

7.  样品处理
----直接取用无色，透明，中性的溶液或按稀释表格进行稀释后进行检测，体积为2.000ml
----过滤混浊溶液
----除去样品溶液中的二氧化碳气体
----加入氢氧化钠或氢氧化钾来调节酸溶液的PH值约为8
----加入氢氧化钠或氢氧化钾来调节酸溶液或淡颜色的溶液的PH值至7-7.5，并孵育约30分钟
----用高氯酸或三氯乙酸除去样品中包被的蛋白质，而后用Carrez试剂澄清
----用热水抽提样品中的脂肪（抽提温度需高于该脂肪的熔点），冷却后分去脂肪，而后移至容量瓶中并加水至刻度线在冰浴中放置15分钟，过滤；热水抽提后用Carrez试剂澄清
----用三氯乙酸或Carrez试剂除去乳剂

8.  过程