食品科技网-产品展销
1. 培养基组分
产品名称
货号
规格
储存条件
NutriStem® MSC XF Basal Medium
间充质干细胞无血清基础培养基
05-200-1A
500 ml
4°C
NutriStem® MSC XF Supplement
间充质干细胞无血清营养添加物
05-201-1U
3 ml
-20°C
NutriStem® MSC XF Basal Medium
间充质干细胞无血清基础培养基
05-200-1B
100 ml
4°C
NutriStem® MSC XF Supplement
间充质干细胞无血清营养添加物
05-201-1-06
0.6 ml
-20°C
注意:
作为完全的，即用型的培养基，不需要额外的添加物。两种组分不单独销售。
2. 产品描述
NutriStem® MSC XF Medium是无血清、不含异源动物成分(Xeno-free) 的人类间充质干细胞培养基，可促进多种来源的人类间充质干细胞的生长，如骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织（AT-hMSC）、脐带（UCM-hMSC）。NutriStem® MSC XF Medium可促进人类间充质干细胞的长期生长，同时还能保持多向分化潜能。NutriStem® MSC XF Medium和MSC间充质干细胞促贴壁试剂（货号: 05-752-1）共同使用，细胞贴壁及增殖效果更好。
3. 特点
l 无血清、不含异源动物成分：所有成分都是明确的，且同种来源（人），包括蛋白质；
l 不含抗生素；
l 能够培养不同来源的人类间充质干细胞；
l 维持人类间间充质干细胞的长期生长，保留类纤维原细胞形态；
l 极低的背景分化率；
l 维持间充质干细胞的自我更新及多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞。
4. hMSCs对NutriStem® MSC XF Medium的适应性
若之前使用血清培养法，转换至NutriStem® MSC XF Medium间充质干细胞无血清培养，可能会面临细胞适应的问题，需要逐步适应，并优化培养方案，建议从原代开始使用。
注意：如同任何培养体系的转换，在新的培养体系下细胞会损失一部分并需要一定过程适应。
5. 注意事项和免责声明
5.1 如果观察培养基中有可见的沉淀物，不能再使用
5.2 超过标签上的截止使用日期，不得再使用
5.3 所有组分均应避光保存
6. 完全即用型培养基的准备
l 冻存的NutriStem® MSC XF Supplement间充质干细胞无血清营养添加物需要在室温或2-8°C解冻，避免重复冻融。
l 完全的NutriStem® MSC XF Medium：将0.6ml的NutriStem®间充质干细胞营养添加物加进100ml的NutriStem®间充质干细胞基础培养基中（同样的，将3ml的NutriStem®间充质干细胞营养添加物加到500ml的NutriStem®间充质干细胞基础培养基中），2-8°C避光保存，混合完全的NutriStem® MSC XF Medium在2-8°C直到14天都是稳定的。
7. MSC贴壁试剂（货号: 05-752-1）的包被培养皿的准备工作
7.1 使用无菌的DPBS溶液（货号: 02-023-1，不含Ca2+ and Mg2+），将MSC促贴壁试剂稀释100倍，用移液管轻轻搅拌混合；
7.2 用稀释过的MSC贴壁试剂涂层培养皿；
7.3 使用合适的量以涂层培养孔或板，使用量参照表1；
7.4 轻轻摇动培养皿，用保鲜膜包裹涂层的培养皿，然后在2-8°C孵育过夜；
7.5 或者在CO2培养箱（36-38°C）至少孵育30分钟；
7.6 接种前，用DPBS轻轻冲洗培养器皿。
表 1 涂层过程中贴壁试剂建议使用量
培养器皿
表面积cm2/孔或瓶
稀释100倍后的MSC贴壁试剂/孔或瓶
注意：
1. 长时间用MSC贴壁试剂孵育(至72hr)不会降低细胞贴壁和扩散性能。
2. 涂层的培养皿需在无菌条件下2-8°C储存，需在一周内使用。
8. 培养hMSCs
8.1 复苏冻存的hMSCs
8.1.1取5-10ml NutriStem® MSC XF Medium完全培养基，放入50ml的圆锥管中，37°C水浴槽预热；
8.1.2将一管冻存的hMSCs直接放在37°C水浴槽快速解冻，并轻微搅拌；
8.1.3慢慢将细胞滴加到预热的培养基中；
8.1.4常温下，细胞在300-400xg离心4-5分钟；
8.1.5除去上清，然后用0.5-1ml的完全培养基重新悬浮细胞；
8.1.6进行活细胞计数（如:台盼蓝拒染实验或XTT）；
8.1.7加一定量的NutriStem® MSC XF Medium完全培养基；
8.1.8将细胞转移到用MSC贴壁试剂包被过的培养皿中，接种密度需要计算（见表2）；
8.1.9 CO2培养箱孵育(36-38°C)
注意：
不建议直接离心解冻复苏之后的hMSCs。
在这种情况下，**好跳过步骤4和5，直接将解冻复苏的细胞加到MSC贴壁溶液涂层的培养皿里，另外加一定量的NutriStem® MSC XF Medium完全培养基。
8.2 接种hMSCs
NutriStem® MSC XF Medium适用于多种来源的hMSCs优化增殖。
MSC来源的多样性和捐赠者的不同会影响MSC增殖速率。为优化hMSCs在NutriStem® MSC XF Medium的增殖，建议接种浓度为5000-6000 cell/cm2（表2），然后每2-3天用新鲜的完全的NutriStem® MSC XF Medium喂养细胞，当达到80%融合时(confluence -即细胞聚集生长面积达到80%的培养皿面积)，进行传代。
注意：
下面的培养方案是基于使用间充质干细胞消化分离溶液(植物酵素)（货号：03-075-1）。另外，也可以使用其他hMSC消化分离试剂，如间充质干细胞消化分离溶液(非酶法)（货号：03-077-1）。在这种情况下，请按照相应的使用说明书进行操作。
接种说明书
8.2.1开始前，将MSC消化分离试剂（货号：03-075-1）预热到室温；
8.2.2移去培养皿中培养基，用不含Ca, Mg 的DPBS浸洗一次；
8.2.3将1-3ml的MSC消化分离试剂加入到T25培养瓶中（分离试剂加样量取决于培养面积大小，以浸没细胞为宜）；
注意事项：细胞融合率愈高或传代次数愈多，分离试剂用量也需相应增加。
8.2.4在室温下孵育2-10分钟，在显微镜下确定细胞分离/脱壁（孵育37°C不会加速分离）。通常在2-5分钟内细胞分离，轻敲培养瓶/或用枪头轻微吹打，可使细胞彻底分离；
8.2.5分离后，在5-10ml的DPBS或用预热的NutriStem® MSC XF Medium中悬浮细胞 将悬浮的细胞收集到15ml的管子中，重新清洗培养瓶可以得到全部的细胞；
8.2.6在室温下，以300-400xg离心细胞4-5分钟，小心地去掉上清液；
8.2.7用少量预热的NutriStem® MSC XF Medium重新悬浮细胞团，进行细胞计数；
8.2.8重新接种细胞到预先涂层的培养板中，按照表2，计算接种密度和需要培养基的量；
8.2.9在CO2培养箱中孵育；
8.2.10每2-3天，用新鲜的NutriStem® MSC XF Medium重新喂养细胞。
表2 建议接种密度（大约5000-6000个细胞/cm2）
培养容器
表面积cm2
培养基用量
建议接种密度
12-well plate
3.8
1ml/well
1.8-2.3 x 104cells / well
6-well plate
9.4
2ml/well
4.5-5.5 x 104cells / well
T25-flask
25
5ml/T-25
12-15 x 104cells / T-25
8.3 hMSCs低温贮藏
8.3.1用低于室温，2-8℃以下的MSC冻存液（货号：05-712-1，建议使用0.5-1 x106细胞/ml，1ml/管）快速悬浮hMSC团；
8.3.2快速将冻存管命名并安放在合适的冻存容器中；
8.3.3将冻存管转移到液态罐中。
9. 质量控制
为保证NutriStem® MSC XF Medium的质量，每个批号的培养基均通过MSC生长曲线试验并能维持和扩增无分化的hMSCs。附加试验：PH，渗透压，内毒素及无菌试验。
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