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更新时间：2012-07-09
呕吐毒素检测试剂盒
概述
脱氧雪腐镰刀菌烯醇是由镰孢菌(霉)属产生的一种低分子量的单端孢霉烯族真菌毒素。这些真菌广泛存在，可以感染大麦，谷物、小麦和玉米。这种毒素是剧毒可以造成免疫功能紊乱，因此避免猪食入。又称为呕吐毒素。
适用
这个REAGEN 呕吐毒素检测试剂盒的原理是竞争酶联免疫反应，用于定量检测谷物、小麦和玉米和动物饲料中的呕吐毒素。
原理
这个REAGEN 呕吐毒素检测试剂盒的原理是固相直接竞争酶联免疫反应。聚苯乙烯微孔板中包被抗呕吐毒素的特异性抗体。利用蒸馏水或无离子水提取样品中的呕吐毒素，把提取的样品和HRP（辣根过氧化物酶）标记的呕吐毒素混匀并加入对应的孔检测。酶标记毒素与标准品或样品中的呕吐霉毒素竞争与包被在微孔底部的抗体结合。孵育一段时间后，倒出孔里的液体，清洗除去没有反应的物质后加入显色底物（TMB），在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合物的量成正比例的关系，与标准品或样品中DON的量成反比例关系。所以，标准品或样品中的DON浓度越高，显色的蓝色将会越浅。加入酸，终止反应，底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里，在OD450nm读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较，相对应得出结果。
试剂盒组成
1×小袋 抗体包被的微孔板 96孔板（12×8微孔板、包被用鼠源呕吐毒素抗体）
1× 预混板（绿色） 96孔板（12×8）没有包被抗体
6×小瓶 DON标准品 1.5mL/瓶，DON的浓度分别为0, 10, 20, 50, 100, and 200 ng/mL
2×小瓶 HRP-DON偶联物 2 x 12mL HRP-DON 添加防腐剂的缓冲溶液
1×小瓶 底物试剂 15mL TMB，
1×小瓶 终止液 15mL 酸性液体
样品提取步骤
注意：样品必须按照有关规定收集
1、研磨样品（使50%的样品可以通过一个20目的滤网）。
2、称量20g研磨过滤后的样品加入100ml蒸馏水或无离子水，样品稀释比为1:5(w/v)。
3、在密封的容器里混合上至少震荡3分钟。
4、静置、用滤纸过滤5-10ml 以上处理的液体，收集滤液。
5、以1：10的比例稀释滤液（取1ml样品提取液然后加入9ml的蒸馏水或无离子水）。
6、样品**终稀释倍数为1：50，待测。
样品测定步骤
注意：在操作时推荐使用排枪，同时每个样品都做2个平行。
1、使用前将试剂拿到室温。
2、取出混合板放于微孔支架上用于标准和样品的测试，取相同数量的微孔（包被有抗体）置于另一个微孔支架上。
3、在每个混合板微孔中加入 200μl 酶标结合物。
4、在对应的孔中加入100 μl 标准或样品，用枪头混合3次，
注意：操作者要把每个孔标记清楚
5、转移100ul预混板微孔中的液体到对应的包被有抗体的微孔中，室温孵育15分，**好使用多道移液器。
6、将孔里的液体倒入合适的容器中，用蒸馏水或无离子水洗板，然后迅速弃掉洗液到合适的容器中，重复洗5次。在一层厚的吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。
7、在吸水纸上拍打，尽可能地将水拍干。
8、每孔加入100 μl底物溶剂，室温孵育5min。
9、每孔加入 100 μl 终止液。
10、对比标准和样品的颜色，或在OD450 nm读数。
结果分析
使用实验获得的OD值与呕吐毒素0标准的OD值的百分比值与标准中呕吐毒素含量建立剂量效应曲线（或直接用OD值与标准的浓度构建剂量效应曲线）。通过在标准品曲线中添加新数值计算被测物质中呕吐毒素的浓度。因为样品在处理的过程中稀释了50倍，所以在计算结果时要乘以稀释倍数50。
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