美国Biostone多物种布鲁氏菌抗体检测试剂盒cELISA(480)
美国Biostone多物种布鲁氏菌抗体检测试剂盒(cELISA)
AsurDxTM Brucella Multispecies Antibody cELISA Test Kit
一、概述
试剂盒用于检测猪牛羊血清和牛奶中流产型布氏杆菌,马耳他布鲁氏菌,绵羊附睾种布鲁氏菌和猪种布鲁氏菌的抗体。试剂盒原理是基于cELISA方法,酶标板上已经包被纯化的布鲁氏菌抗原,样品和酶标抗体加入后,如果样品含有布鲁氏菌抗体,能与板上包被抗原特异性结合形成抗原抗体复合物,并阻断的酶标抗体与板上包被抗原结合。能结合在板上的酶标抗体的酶再催化底物显色,显色深度与样品中的抗体含量成反比关系。
二、试剂盒规格及组分
试剂盒组分 10043-02 10043-05 储存温度
抗原包被板 Brucella antigen-Coated Plate 2*96 5*96 4°C
阳性对照(红盖) Brucella Positive Control 1.8mL 2*1.8mL 4°C
阴性对照(白盖)Brucella Negative Control 1.8mL 2*1.8mL 4°C
酶标抗体Anti-Brucella Antibody-HRP Conjugate 1瓶 2瓶 4°C
10X稀释液10X Diluent Solution 12mL 28mL 4°C
20X洗板液 20X Wash Solution 56mL 120mL 4°C
TMB底物 TMB Substrate 24mL 58mL 4°C
终止液 Stop Solution 24mL 58mL 4°C
备注:如果试剂盒超过一个月不使用建议阴阳性对照和酶标抗体在-20°C储存。
三、试剂以及样品制备
1X稀释液:用9体积的蒸馏水稀释1体积的10X稀释液,得到1X稀释液。
1X洗板液:用19体积的蒸馏水稀释1体积的20X洗板液,得到1X洗板液。
酶标物(冻干粉):先加160ul 1X的稀释液溶解为100X的浓缩液,然后再用1X的稀释液按照检测用量稀释100倍后使用,例如60ul 100x的浓缩液:5940ul 1x的稀释液混匀后足够1板试剂盒的用量。备注:复溶后的100x酶标物保存于2-8°C的有效期为三个月,保存于-20°C的有效期为一年。
小反刍动物血清(山羊,绵羊)预稀释:在血清稀释板上使用1X稀释液将样品血清稀释5倍,例如将40uL的血清加入到160uL的1X稀释液中混匀,备用。
牛或者猪血清预稀释:在血清稀释板上使用1X稀释液将样品血清稀释10倍,例如将20uL的血清加入到180uL的1X稀释液中混匀,备用。
牛奶样品:在血清稀释板上使用1X稀释液将样品血清稀释2倍,例如将100uL的牛奶加入到100uL的1X稀释液中混匀,备用。
四、实验操作
试剂 每孔用量
样品/对照 50uL
酶标抗体 50uL
1X洗板液 2mL
底物 100uL
终止液 100uL
1. 实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出回复室温;
2. 设置好对照及样品在抗原包被板的位置;
3. 加入50uL的阳性对照到抗原包被板两个孔中(阳性对照使用前先振荡混匀);
4. 加入50uL的阴性对照到抗原包被板的另外两个孔中;(强烈建议将阴性和阳性对照血清分隔加入,例如左上方加阳性对照,右下方加阴性对照)
5. 其他孔各加入50uL预稀释的血清样品或者牛奶样品.
6. 每孔加入50uL酶标抗体,轻微振荡1分钟;
7. 封板,室温(20-25°C)下孵育60分钟;(注意避免阳光直射和空气进入板中)
8. 弃去板中的液体;
9. 每孔加入250uL洗涤液洗板5次,**后一次请把板孔拍干;
10. 每孔加入100uL的TMB底物,室温下暗处孵育15分钟;
11. 每孔加入100uL终止液,然后酶标仪450nm读数;
五、结果判断
样品阻断率PI值=[1-(样品OD值÷阴性对照OD值)]*100
有效性:阳性对照的PI值必须大于55%,阴性对照OD值的平均值必须≥0.8
血清样品
阴性:样品的PI值小于30%,样品血清中抗体阴性
阳性:样品的PI值大于30%,样品血清中抗体阳性
牛奶样品
阴性:样品的PI值小于30%,样品中抗体阴性
阳性:样品的PI值大于30%,样品中抗体阳性