转基因食品中Cry1Ac基因核酸检测试剂盒

本试剂盒采用实时荧光PCR技术，针对Cry1Ac基因的核酸序列设计特异性引物和探针，通过实时荧光PCR反应对转基因成分进行定性检测。本试剂盒适用于大豆、玉米、番茄、马铃薯、水稻、小麦等农产品及其加工产品中转基因成分的定性PCR检测，加工产品不包含食用油脂和调味品。

参考标准    行业标准SNT 1202-2010

产品规格     40次/盒 

储存条件   本试剂盒保存于-20℃，有效期12个月。

检测步骤

1.样本处理

采用均质器、搅拌机、研钵等实验器皿对样本进行均质处理。

2.样本DNA提取

采用商品化的植物基因组DNA提取试剂盒，按照试剂盒说明提取样本DNA。对提取的DNA    进行浓度测定，DNA溶液的OD260/280比值在 1.7-2.0 为**佳。 

3.试剂准备

冰上解冻反应试剂，反应液保持避光，解冻后将反应液混匀并简短离心，按每管22ul的量分装至PCR管中。

4.PCR加样

每管中加入DNA样本3ul（DNA浓度为    50ng/ul左右），盖好管盖，简短离心，同时做阳性对照，阴性对照和空白对照（以水代替样本DNA）。

5.PCR扩增

将加好的样品放置在PCR仪中，荧光通道选择FAM， PCR反应参数见表，使用不同的PCR    仪，反应参数可适当调整 

6.结果分析

基线和阈值的设置：基线范围设置在3-15个循环，阈值设置在基线刚好超过阴性对照扩增曲线的**高点。

质量控制：阳性对照CT≤30，有S型扩增曲线；阴性对照无CT值，扩增曲线为直线；空白对照无CT值，扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常，需重做实验。

结果判定

1.检测样品无CT值，曲线为直线或无S型扩增曲线，判定结果为阴性。

2.检测样品CT≤36，出现S型扩增曲线，判定结果为阳性。

3.检测样品36﹤CT﹤40并有S型扩增曲线，需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测，再次检测结果CT值仍处于36和40之间，并且有S 型扩增曲线，判定结果为阳性，否则判定为阴性。

**低检测限    0.1% 

注意事项

1.初次使用前请仔细阅读说明书，并严格按照说明书进行操作。

2.实验操作要严格分区，防止污染。

3.建议先用实时荧光PCR法检测内源基因来判定样本提取的DNA是否满足    PCR检测要求。

4.反应液反复冻融会降低灵敏度，建议分管保存。

5.本试剂盒仅供定性筛查用。