单增李斯特菌活菌检测试剂盒

      食品受到单增李斯特菌污染的报告屡见不鲜，引起了人们的普遍关注。研究表明，由单增李斯特菌引起的食物中毒主要发生在水分活度较高的食品当中，如肉类、禽类、乳及乳制品、水产品等，本公司自主研发的单增李斯特菌活菌检测试剂盒能快速特异地检测出此类食品中含有的单增李斯特菌，且相比DNA-PCR的检测方法，本检测方法可以区分死菌和活菌，因此不需要进行再次验证。本试剂盒采用实时荧光RT-PCR反应对食品中的单增李斯特菌进行检测，灵敏度高，特异性强，适用于乳制品、肉制品和水产品中单增李斯特菌的定性检测。

检测步骤

1.样本处理 

取25ml(g)样品，加入225ml        的培养基，均质后于 37度增菌培养约20h        。  

2 取1ml增菌液，采用商品化的细菌RNA提取试剂盒，按照试剂盒说明提取样本 RNA。采用反转录试剂盒将RNA反转录成 cDNA 待用。  

3.试剂准备  冰上解冻反应试剂，反应液保持避光，解冻后将反应液混匀并简短离心，按每管15ul的量分装至PCR        管中。  

4.PCR加样

每管中加入cDNA样本10ul        ，盖好管盖，简短离心，同时做阳性对照，阴性对照和空白对照（以水代替样本 cDNA）。        

 5.PCR扩增

将加好的样品放置在PCR 仪中，荧光通道选择 FAM ， PCR 反应参数见表，使用不同的PCR仪，反应参数可适当调整。   

6.结果分析

 基线和阈值的设置：基线范围设置在3-15个循环，阈值设置在基线刚好超过阴性对照扩增曲线的**高点。

 质量控制：阳性对照CT≤30，有S        型扩增曲线；阴性对照无CT值，扩增曲线为直线；空白对照无CT值，扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常，需重做实验。 

结果判定

1.检测样品无CT值，曲线为直线或无S 型扩增曲线，判定结果为阴性。  

2.检测样品CT≤35，出现S型扩增曲线，判定结果为阳性。

3.检测样品35﹤CT﹤40并有S型扩增曲线，需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测，再次检测结果CT值仍处于35和40之间，并且有S 型扩增曲线，判定结果为阳性，否则判定为阴性。

**低检测限

 6cfu/25g(ml) 

包装规格  40次/盒 

注意事项

   1.初次使用前请仔细阅读说明书，并严格按照说明书进行操作。

   2.实验操作要严格分区，防止污染。

   3.RNA提取时要使用无RNA酶的枪头和管子，防止RNA降解。

   4.反应液反复冻融会降低灵敏度，建议分管保存。

   5.本试剂盒仅供定性筛查用。

储藏条件与有效期

本试剂盒保存于-20℃，有效期12个月。