沙门氏菌活菌检测试剂盒

沙门氏菌（Salmonella）是**常见的食源性细菌病原体，沙门氏菌主要污染肉类食品，家禽、蛋类、乳类及其制品也可受沙门氏菌污染。本公司自主研制的沙门氏菌活菌荧光PCR检测试剂盒能快速检测出此类食品中存在的沙门氏菌菌属，且相比DNA-PCR的检测方法，本检测方法可以区分死菌和活菌，因此不需要进行再次验证。

本试剂盒采用实时荧光RT-PCR技术，针对沙门氏菌基因的核酸序列设计特异性引物和探针，通过实时荧光PCR反应对食品中的沙门氏菌进行定性检测，适用于牛奶、果汁、肉制品中沙门氏菌的定性检测。

产品规格

 40次/盒 

保存条件 

本试剂盒保存于-20℃，有效期12 个月。 

检测步骤

 1.样本处理

 取25ml(g)样品，加入225ml的培养基，均质后于        37度增菌培养约15h。

 2.样本RNA提取

 取1ml增菌液，采用商品化的细菌RNA提取试剂盒，按照试剂盒说明提取样本RNA。采用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA 待用。   

3.试剂准备

 冰上解冻反应试剂，反应液保持避光，解冻后将反应液混匀并简短离心，按每管15ul的量分装至PCR管中。            

  4.PCR加样

每管中加入cDNA样本10ul，盖好管盖，简短离心，同时做阳性对照，阴性对照和空白对照（以水代替样本            cDNA）。

5.PCR扩增

将加好的样品放置在PCR仪中，荧光通道选择FAM， PCR反应参数见表，使用不同的PCR仪，反应参数可适当调整。 

6.结果分析

基线和阈值的设置：基线范围设置在3-15个循环，阈值设置在基线刚好超过阴性对照扩增曲线的**高点。

质量控制：阳性对照CT≤30，有S    型扩增曲线；阴性对照无CT值，扩增曲线为直线；空白对照无CT值，扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常，需重做实验。 

结果判定

1.检测样品无CT值，曲线为直线或无S型扩增曲线，判定结果为阴性。  

2.检测样品CT≤35，出现S型扩增曲线，判定结果为阳性。

3.检测样品35﹤CT﹤40并有S型扩增曲线，需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测，再次检测结果CT值仍处于35和40之间，并且有S 型扩增曲线，判定结果为阳性，否则判定为阴性。

**低检测限 

6cfu/25g(ml) 

注意事项

1.初次使用前请仔细阅读说明书，并严格按照说明书进行操作。 

2.实验操作要严格分区，防止污染。

3.RNA提取时要使用无RNA酶的枪头和管子，防止RNA 降解。 

 4.反应液反复冻融会降低灵敏度，建议分管保存。 

5.本试剂盒仅供定性筛查用。