大肠杆菌基因敲除试剂盒(10T/盒)

大肠杆菌基因删除试剂盒说明书

一、概述

本试剂盒借助高效的 Red 重组系统实现突变基因盒在大肠杆菌基因组中的

高效率重组，再利用自身的 Xer 重组系统实现靶基因突变后选择性标记高效删

除。由此，可进行以大肠杆菌基因组为背景的多位点、多基因删除，方法简便，

重组效率高， 所获得的突变菌株染色体上无抗生素标记痕迹。 本试剂盒理论上可

以进行接近无限次的基因突变， 故本试剂盒还可以用于大肠杆菌基因组**小化研

究。使用本试剂盒，我们进行过**多 15 个基因的叠加删除。此外，本试剂盒经

过适当修饰后可以同步用于外源基因在大肠杆菌基因组中整合表达等。

二、试剂盒制成及包装

2.1 本试剂盒提供的试剂与材如下表，可以满足 10 个单批操作。

生物材料  相关特征  数量

引物 Gm1  GGTGCGCATAATGTATATTATGTTAAAT  25 mL

引物 Gm2  ATTTAACATAATATACATTATGCGCACC  25 mL

抗性片段  dif-Gm-dif 片段，含有庆大霉素抗性基因  10 mL

pKD46  含有 bla, γ β exo (red 重组酶系), 温控复制子  4 mL

2.2 需要自己准备的生物材料

1）特定基因 PCR 操作需要的引物。

2）大肠杆菌：自己研究的对象。

3）克隆 PCR 产物的 T-载体，如：pMD18-T。

4）限制性酶。

5）T 4 DNA 连接酶