大鼠膀胱肿瘤抗原试剂盒

ELISA实验注意事项：

1）ELISA实验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制实验条件，待检样品应一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清等封闭。

2）在ELISA实验中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：

（1）ELISA实验固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等，形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。

目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管选择何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应的均一性，据此判明其吸附性能。

（2）ELISA实验包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求pH在9.0-9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用4 ℃18-24 h。蛋白质包被的**适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它实验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值**大而蛋白量**少的浓度，对于多数蛋白质来说通常为1-10μg/ml。

（3）ELISA实验中酶标记抗体工作浓度的选择：**先用直接ELISA实验法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式ELISA实验系统里准确地滴定其工作浓度。

（4）ELISA实验中酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显的显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30 min为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

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