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站点位置:首页 > 产品展销 > 实验室用品 > 培养基 > 其他培养基 > MSC无血清培养基(NutriStem® MSC XF Medium) 【手机阅读】
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MSC无血清培养基(NutriStem® MSC XF Medium)

所在区域:上海 上海市 上海市区
更新时间:2014-02-12
品牌:Bioind(BI)
产品价格:面议
MSC无血清培养基

1. 培养基组分

产品名称

货号

规格

储存条件

NutriStem® MSC XF Basal Medium

间充质干细胞无血清基础培养基

05-200-1A

500 ml

4°C

NutriStem® MSC XF Supplement

间充质干细胞无血清营养添加物

05-201-1U

3 ml

-20°C

NutriStem® MSC XF Basal Medium

间充质干细胞无血清基础培养基

05-200-1B

100 ml

4°C

NutriStem® MSC XF Supplement

间充质干细胞无血清营养添加物

05-201-1-06

0.6 ml

-20°C

注意:

作为完全的,即用型的培养基,不需要额外的添加物。两种组分不单独销售。


2. 产品描述

NutriStem® MSC XF Medium是无血清、不含异源动物成分(Xeno-free) 的人类间充质干细胞培养基,可促进多种来源的人类间充质干细胞的生长,如骨髓(BM-hMSC)、脂肪组织(AT-hMSC)、脐带(UCM-hMSC)。NutriStem® MSC XF Medium可促进人类间充质干细胞的长期生长,同时还能保持多向分化潜能。NutriStem® MSC XF Medium和MSC间充质干细胞促贴壁试剂(货号: 05-752-1)共同使用,细胞贴壁及增殖效果更好。


3. 特点

l         无血清、不含异源动物成分:所有成分都是明确的,且同种来源(人),包括蛋白质;

l         不含抗生素;

l         能够培养不同来源的人类间充质干细胞;

l         维持人类间间充质干细胞的长期生长,保留类纤维原细胞形态;

l         极低的背景分化率;

l         维持间充质干细胞的自我更新及多向分化潜能,可分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞。


4. hMSCs对NutriStem® MSC XF Medium的适应性

若之前使用血清培养法,转换至NutriStem® MSC XF Medium间充质干细胞无血清培养,可能会面临细胞适应的问题,需要逐步适应,并优化培养方案,建议从原代开始使用。

注意:如同任何培养体系的转换,在新的培养体系下细胞会损失一部分并需要一定过程适应。



5. 注意事项和免责声明


5.1 如果观察培养基中有可见的沉淀物,不能再使用

5.2 超过标签上的截止使用日期,不得再使用

5.3 所有组分均应避光保存


6. 完全即用型培养基的准备

l         冻存的NutriStem® MSC XF Supplement间充质干细胞无血清营养添加物需要在室温或2-8°C解冻,避免重复冻融。

l         完全的NutriStem® MSC XF Medium:将0.6ml的NutriStem®间充质干细胞营养添加物加进100ml的NutriStem®间充质干细胞基础培养基中(同样的,将3ml的NutriStem®间充质干细胞营养添加物加到500ml的NutriStem®间充质干细胞基础培养基中),2-8°C避光保存,混合完全的NutriStem® MSC XF Medium在2-8°C直到14天都是稳定的。


7. MSC贴壁试剂(货号: 05-752-1)的包被培养皿的准备工作

7.1 使用无菌的DPBS溶液(货号: 02-023-1,不含Ca2+ and Mg2+),将MSC促贴壁试剂稀释100倍,用移液管轻轻搅拌混合;

7.2 用稀释过的MSC贴壁试剂涂层培养皿;

7.3 使用合适的量以涂层培养孔或板,使用量参照表1;

7.4 轻轻摇动培养皿,用保鲜膜包裹涂层的培养皿,然后在2-8°C孵育过夜;

7.5 或者在CO2培养箱(36-38°C)至少孵育30分钟;

7.6 接种前,用DPBS轻轻冲洗培养器皿。


表 1  涂层过程中贴壁试剂建议使用量

培养器皿

表面积cm2/孔或瓶

稀释100倍后的MSC贴壁试剂/孔或瓶


注意:

1. 长时间用MSC贴壁试剂孵育(至72hr)不会降低细胞贴壁和扩散性能。

2. 涂层的培养皿需在无菌条件下2-8°C储存,需在一周内使用。


8. 培养hMSCs

8.1 复苏冻存的hMSCs


8.1.1取5-10ml NutriStem® MSC XF Medium完全培养基,放入50ml的圆锥管中,37°C水浴槽预热;

8.1.2将一管冻存的hMSCs直接放在37°C水浴槽快速解冻,并轻微搅拌;

8.1.3慢慢将细胞滴加到预热的培养基中;

8.1.4常温下,细胞在300-400xg离心4-5分钟;

8.1.5除去上清,然后用0.5-1ml的完全培养基重新悬浮细胞;

8.1.6进行活细胞计数(如:台盼蓝拒染实验或XTT);

8.1.7加一定量的NutriStem® MSC XF Medium完全培养基;

8.1.8将细胞转移到用MSC贴壁试剂包被过的培养皿中,接种密度需要计算(见表2);

8.1.9 CO2培养箱孵育(36-38°C)


注意:

不建议直接离心解冻复苏之后的hMSCs。

在这种情况下,最好跳过步骤4和5,直接将解冻复苏的细胞加到MSC贴壁溶液涂层的培养皿里,另外加一定量的NutriStem® MSC XF Medium完全培养基。


8.2 接种hMSCs

NutriStem® MSC XF Medium适用于多种来源的hMSCs优化增殖。

MSC来源的多样性和捐赠者的不同会影响MSC增殖速率。为优化hMSCs在NutriStem® MSC XF Medium的增殖,建议接种浓度为5000-6000 cell/cm2(表2),然后每2-3天用新鲜的完全的NutriStem® MSC XF Medium喂养细胞,当达到80%融合时(confluence -即细胞聚集生长面积达到80%的培养皿面积),进行传代。


注意:

下面的培养方案是基于使用间充质干细胞消化分离溶液(植物酵素)(货号:03-075-1)。另外,也可以使用其他hMSC消化分离试剂,如间充质干细胞消化分离溶液(非酶法)(货号:03-077-1)。在这种情况下,请按照相应的使用说明书进行操作。


接种说明书

8.2.1开始前,将MSC消化分离试剂(货号:03-075-1)预热到室温;

8.2.2移去培养皿中培养基,用不含Ca, Mg 的DPBS浸洗一次;

8.2.3将1-3ml的MSC消化分离试剂加入到T25培养瓶中(分离试剂加样量取决于培养面积大小,以浸没细胞为宜);

注意事项:细胞融合率愈高或传代次数愈多,分离试剂用量也需相应增加。

8.2.4在室温下孵育2-10分钟,在显微镜下确定细胞分离/脱壁(孵育37°C不会加速分离)。通常在2-5分钟内细胞分离,轻敲培养瓶/或用枪头轻微吹打,可使细胞彻底分离;

8.2.5分离后,在5-10ml的DPBS或用预热的NutriStem® MSC XF Medium中悬浮细胞 将悬浮的细胞收集到15ml的管子中,重新清洗培养瓶可以得到全部的细胞;

8.2.6在室温下,以300-400xg离心细胞4-5分钟,小心地去掉上清液;

8.2.7用少量预热的NutriStem® MSC XF Medium重新悬浮细胞团,进行细胞计数;

8.2.8重新接种细胞到预先涂层的培养板中,按照表2,计算接种密度和需要培养基的量;

8.2.9在CO2培养箱中孵育;

8.2.10每2-3天,用新鲜的NutriStem® MSC XF Medium重新喂养细胞。

表2 建议接种密度(大约5000-6000个细胞/cm2)

培养容器

表面积cm2

培养基用量

建议接种密度

12-well plate

3.8

1ml/well

1.8-2.3 x 104cells / well

6-well plate

9.4

2ml/well

4.5-5.5 x 104cells / well

T25-flask

25

5ml/T-25

12-15 x 104cells / T-25


8.3 hMSCs低温贮藏

8.3.1用低于室温,2-8℃以下的MSC冻存液(货号:05-712-1,建议使用0.5-1 x106细胞/ml,1ml/管)快速悬浮hMSC团;

8.3.2快速将冻存管命名并安放在合适的冻存容器中;

8.3.3将冻存管转移到液态罐中。


9. 质量控制

为保证NutriStem® MSC XF Medium的质量,每个批号的培养基均通过MSC生长曲线试验并能维持和扩增无分化的hMSCs。附加试验:PH,渗透压,内毒素及无菌试验。

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