供应 美国helica黄曲霉毒素M1检测试剂盒

美国helica黄曲霉毒素M1检测试剂盒
1．概述
本产品是一敏感的用于定量检测黄曲霉毒素M1的免疫学检测方法。适用于牛奶和一些乳制品中黄曲霉毒素M1的检测。如果有必要可以利用HPLC, GC/MS方法加以证实。
2. 安全性说明
试剂盒含有少量的黄曲霉毒素M1；底物中含有四甲基联苯胺；终止液中含有稀硫酸，避免皮肤和粘膜接触终止液；以上各溶剂不小心滴到皮肤上请用水冲洗。
3. 存储和稳定性
存储：4–8℃
在使用前试剂盒的温度要恢复到室温(20-25℃)。
试剂在有效期内都可以使用。
4．原理
此试剂盒是通过AFM1抗体来检测AFM1的。将标准品或样品加入到微孔中和包被在微孔底部的抗AFM1的高亲和力抗体发生反应。如果样品中存在AFM1，它将和包被的抗体结合，此过程孵育30分钟，洗板。然后加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的毒素，酶标记毒素与标准品或者样品与抗体没有结合的部位相结合。孵育60分钟，倒出孔里的液体，清洗后加入显色底物作用20分钟，在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合的酶结合物的量成正比例的关系，与标准品或样品中AFM1的量成反比例关系。所以，标准品或样品中的AFM1浓度越高，显色的蓝色将会越浅。加入酸，终止反应，底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里，在OD450nm 读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较，相对应得出结果。
5. 操作数据
敏感性：黄曲霉毒素M1的检测限1 pg/mL，检测结果越靠近曲线的中间越准确。
重复性：标准的变异系数小于 10%；样品的变异系数小于<15%。
特异性：和黄曲霉毒素(B1,B2,G1,G2)无交叉反应

回收率：
M1 spiked（ppt） M1 recowered（ppt） recowered（%）
50 50.3 100.6
100 104.6 104.6
200 188.1 94.1
Average recowered 99.8
6 ．试剂盒组成
1. 真空包装微孔板（12×8条）包被有黄曲霉毒素M1多克隆抗体。
2. 黄曲霉毒素M1标准液：（6）0，15，25，50，100，250pg/ml（ppt），每种1ml。
3. 1 瓶12ml  HRP酶标记的黄曲霉毒素M1结合物。
4. 1 瓶14 mL 底物显色液。
5. 1瓶100ml洗板缓冲液(5倍浓缩)，即用即配，例如：10ml浓缩缓冲液+40ml蒸馏水
6. 1 瓶 6 mL 终止液. 
7. 英文操作说明书
7. 操作步骤
1. 在对应的微孔中加入100 μL 标准或样品。**好做重复。
2. 在室温下孵育30分。
3. 将孔里的液体倒入合适的容器中，每个微孔至少加入250μL、1×洗液，然后弃掉洗液到合适的容器中，重复洗3次。在一吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。
4. 使用排枪在每个孔中加入 100 μL 酶结合物。
5. 在室温孵育60分。
6. 将孔里的液体倒入合适的容器中，每个微孔至少加入250μL、 1×洗液，然后弃掉洗液到合适的容器中，重复洗3次。在一层厚的吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。
7. 每孔加入 100 μL底物显色液，在室温孵育20分。尽量使其不见光。
8. 每孔加入 50 μL终止液，板中颜色将会由蓝色变为棕黄色。
9  450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）。
8. 结果评估
可以利用商业ELISA软件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 来评价ELISA结果。也可以通过计算每个标准的%B/B0值，以%B/B0为y轴、黄曲霉毒素M1浓度为x轴作一标准曲线。样品浓度可以通过标准曲线来计算。当样品的浓度小于标准1 (15 pg/mL or ppt)时报道称浓度小于15ppt，当浓度大于250ppt时要稀释后再测定。
半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的黄曲霉毒素M1含量大于此标准的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的黄曲霉毒素M1含量小于此标准的浓度。